产品目录

本试剂盒可以从各种菌体中提取总蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及总蛋白制备。提取过程简单方便。本试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。根据不同菌种盒不同的培养情况，每毫升菌液大概可以提得5～10mg蛋白。采用BCA或Lowry法进行蛋白定量。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白样本含高浓度盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号试剂盒。也可将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（HR0389）。

• 使用方便：不需昂贵设备。
  
• 可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。
  
• 将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
  
• 本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
  
• 本试剂盒中提取液和蛋白酶抑制剂中均不含EDTA，根据需要可自行加入。

• 提取液的准备：
  根据所需要提取的样本量，每500μL提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物和2μL磷酸酶抑制剂混合物和5μL蛋白稳定液，充分混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  ● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
  
• 在4℃，12000×g条件下将菌液离心5分钟，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。
  
• 用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
  
• 按每50～100mg湿重菌体样本加入500μL蛋白提取液，充分混匀，振荡20～30分钟。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  ● 每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
  
• 在150w-300w，10s超声/10s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。
  注：
  ● 若无超声条件，可不超声，将菌体样本用液氮充分研磨。没有液氮研磨就用提取液A直接研磨。
  ● 若无研磨条件，将上一步骤裂解液处理时间延长，持续振荡30分钟～1小时。
  ● 如果没有振荡条件，可以在室温或37℃静置，中间每隔10分钟涡旋振荡混匀，至澄清。
  ● 超声时间尽量短，提取液变清即可，一般不超过20分钟。
  ● 如果超声时出现黑色沉淀，说明超声功率过大，需要降低功率。
  ● 避免产生泡沫。
  
• 在4℃，12000×g条件下将菌液离心15分钟，将上清移入冷的干净离心管。
  
• 即得到大肠杆菌总蛋白样品。
  
• 将总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。最好超声处理，没有超声条件只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。